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在分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)研究中，免疫共沉淀(Co-IP)和免疫沉淀(IP)實(shí)驗(yàn)是探索蛋白質(zhì)相互作用、驗(yàn)證靶蛋白結(jié)合關(guān)系的關(guān)鍵技術(shù)。無論是研究信號(hào)通路、蛋白復(fù)合物，還是疾病相關(guān)蛋白網(wǎng)絡(luò)，IP/Co-IP都能提供直接的實(shí)驗(yàn)證據(jù)，幫助科學(xué)家深入解析生命活動(dòng)的分子機(jī)制。本期內(nèi)容將系統(tǒng)梳理IP/Co-IP實(shí)驗(yàn)的詳細(xì)步驟以及如何分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。一、實(shí)驗(yàn)原理免疫沉淀/免疫共沉淀是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)的方法。在免疫沉淀中，通過特定抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，形成抗體—抗原復(fù)合...

WB實(shí)驗(yàn)即蛋白質(zhì)印跡法，是分子生物學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域常用的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它依據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合原理，能對(duì)樣品中的特定蛋白質(zhì)進(jìn)行定性或半定量分析。WB實(shí)驗(yàn)憑借高特異性和靈敏度，在蛋白質(zhì)表達(dá)水平研究、蛋白質(zhì)分子大小鑒定、疾病標(biāo)志物檢測(cè)等方面發(fā)揮著重要作用，是生命科學(xué)研究中不ke或缺的有力工具。實(shí)驗(yàn)原理WB實(shí)驗(yàn)基于抗原-抗體的特異性結(jié)合反應(yīng)，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)，將其轉(zhuǎn)移至固相載體(如PVDF膜)，再利用特異性一抗和酶標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測(cè)，最終通過化學(xué)發(fā)光或顯色反應(yīng)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)...

IP/COIP常見問題1、設(shè)置實(shí)驗(yàn)對(duì)照陽性對(duì)照：input,即裂解后的上清，判斷目的蛋白是否表達(dá)。陰性對(duì)照：和ip抗體同型的IgG。2、抗體、樣本、beads的加入順序①抗體先與蛋白結(jié)合，再加入beads;②抗體先與beads孵育，最后加入蛋白；③抗體、樣本和beads同時(shí)加入。一般情況下①和②相差不大，如果蛋白量過高，比如大于1000ug,建議使用第二種，否則蛋白容易吸附在磁珠上，降低得率。3、beads磁珠和瓊脂糖珠如何選擇瓊脂糖珠：需要離心，操作繁瑣；吸走上清時(shí)容易吸走...

DAB顯色試劑盒是一種基于辣根過氧化物酶(HRP)催化反應(yīng)的顯色試劑盒，廣泛應(yīng)用于免疫組化、原位雜交、WesternBlotting、SouthernBlotting、NorthernBlotting及EMSA等實(shí)驗(yàn)中，用于檢測(cè)HRP標(biāo)記的抗體或探針結(jié)合的靶標(biāo)。DAB顯色試劑盒操作步驟(以組織切片為例)樣本準(zhǔn)備：組織切片經(jīng)抗原修復(fù)、封閉后，與HRP標(biāo)記的抗體孵育。洗滌：用TBS或PBS洗滌3-5次，每次3-5分鐘，去除未結(jié)合抗體。配制DAB工作液：按比例混合A液(濃縮DAB)...

全機(jī)型通用熒光定量試劑從試劑配方優(yōu)化、預(yù)混設(shè)計(jì)以及廣泛的儀器兼容性等多方面著手，有效提升了PCR實(shí)驗(yàn)的效率，為科研工作者和實(shí)驗(yàn)人員節(jié)省了寶貴的時(shí)間，推動(dòng)了相關(guān)研究和檢測(cè)工作的快速進(jìn)展。優(yōu)化試劑配方，加快反應(yīng)進(jìn)程部分全機(jī)型通用熒光定量試劑通過定向優(yōu)化擴(kuò)增酶性能，能夠顯著縮短退火延伸時(shí)間。以某款試劑為例，在原有技術(shù)基礎(chǔ)上，其45個(gè)擴(kuò)增循環(huán)時(shí)間可縮短至20-30分鐘，時(shí)間節(jié)省50%以上。同時(shí)，一些試劑采用了抗體修飾的AntiTaqDNA聚合酶，配合qPCRBuffer體系，不僅確保...

無縫克隆試劑盒基于同源重組原理，通過插入片段與線性化載體末端的同源序列(15-25bp)實(shí)現(xiàn)定向重組，無需酶切與連接步驟，具有操作便捷、陽性率高(可達(dá)95%以上)、支持多片段重組等優(yōu)勢(shì)。無縫克隆試劑盒其使用流程可分為以下三個(gè)核心步驟：一、線性化載體制備酶切法雙酶切：選擇載體中兩個(gè)不同的酶切位點(diǎn)，用限制性內(nèi)切酶消化載體，通過凝膠電泳分離并回收線性化載體。雙酶切可降低載體自連背景，提高陽性率。單酶切：若無可選雙酶切位點(diǎn)，可采用單酶切，但需延長(zhǎng)酶切時(shí)間(2小時(shí)至過夜)并進(jìn)行脫磷處理...

在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中，綠色熒光蛋白（GFP）因其熒光特性，成為觀察生物分子動(dòng)態(tài)的“可視化標(biāo)簽”。而GFP瓊脂糖作為將GFP抗體與瓊脂糖凝膠結(jié)合的親和介質(zhì)，正以其高效特異性，在蛋白質(zhì)純化、互作分析等領(lǐng)域展現(xiàn)出不可替代的實(shí)驗(yàn)價(jià)值。GFP瓊脂糖的核心優(yōu)勢(shì)在于靶向捕獲能力。當(dāng)含GFP標(biāo)簽的重組蛋白混合液流過瓊脂糖柱時(shí)，凝膠基質(zhì)上的GFP抗體可精準(zhǔn)識(shí)別并結(jié)合目標(biāo)蛋白，通過洗滌去除雜蛋白后，僅需改變緩沖液pH值即可實(shí)現(xiàn)高效洗脫。這種“一站式”純化流程不僅將傳統(tǒng)方法的多步操作簡(jiǎn)化為柱層析步...

隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，預(yù)染蛋白Marker在蛋白質(zhì)分析、分離和鑒定中扮演著越來越重要的角色。預(yù)染蛋白Marker是指那些已經(jīng)通過染料標(biāo)記的標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)，在凝膠電泳中用于分子量標(biāo)定。與傳統(tǒng)的未染色Marker相比，它不僅具有便于觀察的可視化優(yōu)勢(shì)，還在多種實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中提供了更高的效率和可靠性。工作原理預(yù)染蛋白Marker的基本原理是通過化學(xué)染料與蛋白質(zhì)結(jié)合，使得Marker蛋白在凝膠電泳過程中能夠被染色并在紫外光下可見。這些蛋白質(zhì)通常具有已知的分子量和穩(wěn)定的遷移率，因此它們被...